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BUNSEN資訊| ELISA試劑盒的空白孔設(shè)置及注意事項(xiàng)

更新時(shí)間:2024-02-29    點(diǎn)擊次數(shù):1883

  BUNSEN資訊| ELISA試劑盒的空白孔設(shè)置及注意事項(xiàng)


  ELISA試劑盒的空白孔設(shè)置步驟如下:

  1. 空氣空白\水空白:一般是用于儀器調(diào)零的,所有孔數(shù)值減掉該孔數(shù)值。

  2.底物空白:一般是用于防止底物弱顯色所造成的讀數(shù)偏高,同樣所有孔數(shù)值減掉該孔數(shù)值(只加底物和終止液)

  3. 酶空白:一般在2步法實(shí)驗(yàn)中使用,主要是看酶是否和板有非特異性結(jié)合的,一般不做這個(gè) 。

  


  ELISA試劑盒空白孔一般設(shè)一個(gè),這是為了減除顯色液的OD值。而陰性和陽(yáng)性標(biāo)準(zhǔn)品最好是設(shè)2個(gè)復(fù)孔,雖然有點(diǎn)浪費(fèi),但為了確保實(shí)驗(yàn)的可靠性,我認(rèn)為還是很有必要的。ELISA試劑盒空白孔加什么?一般兩個(gè)做法,看個(gè)人習(xí)慣或者說(shuō)看你們實(shí)驗(yàn)室的習(xí)慣:

  1,什么都不加,然后那個(gè)孔按照操作流程來(lái)做,這個(gè)說(shuō)法的根據(jù)就是空白,也就是什么都沒有。

  2,加樣本稀釋液,然后按照操作流程來(lái)做。這個(gè)做法的根據(jù)就是只要不含陽(yáng)性物質(zhì)就算是空白的,加入樣本稀釋液的目的是為了使這個(gè)孔除了在沒有陽(yáng)性物質(zhì)上其他的都與其他孔一致。

  ELISA試劑盒注意事項(xiàng):

  1、血清標(biāo)本可按常規(guī)方法采集,應(yīng)注意避免溶血,紅細(xì)胞溶解時(shí)會(huì)釋放出具有過(guò)氧化物酶活性的物質(zhì),以HRP為標(biāo)記的ELISA測(cè)定中,溶血標(biāo)本可能會(huì)增加非特異性顯色。

  2、 血清標(biāo)本宜在新鮮時(shí)檢測(cè)。如有細(xì)菌污染,菌體中可能含有內(nèi)源性HRP,也會(huì)產(chǎn)生假陽(yáng)性反應(yīng)。如在冰箱中保存過(guò)久,其中的可發(fā)生聚合,在間接法ELISA中可使本底加深。

  3、一般說(shuō)來(lái),在5天內(nèi)測(cè)定的血清標(biāo)本可放置于4℃,超過(guò)一周測(cè)定的需低溫冰存。凍結(jié)血清融解后,蛋白質(zhì)局部濃縮,分布不均,應(yīng)充分混勻宜輕緩,避免氣泡,可上下顛倒混和,不要在混勻器上強(qiáng)烈振蕩?;鞚峄蛴谐恋淼难鍢?biāo)本應(yīng)先離心或過(guò)濾,澄清后再檢測(cè)。反復(fù)凍融會(huì)使抗體效價(jià)跌落,所以測(cè)抗體的血清標(biāo)本如需保存作多次檢測(cè),宜少量分裝冰存。保存血清自采集時(shí)就應(yīng)注意無(wú)菌操作,也可加入適當(dāng)防腐劑。

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